昨天，小達(dá)君為大家?guī)砹丝贵w純化用IBA新品—Protein A Agarose，今天我們繼續(xù)來說說蛋白表達(dá)純化那點(diǎn)事兒。

通常，我們會(huì)利用融合標(biāo)簽與目的蛋白的融合表達(dá)實(shí)現(xiàn)某些實(shí)驗(yàn)?zāi)康模纾鞍准兓⊿trep-tag、His）、增強(qiáng)蛋白的可溶性（MBP、GST）、增加蛋白的表達(dá)量（Flag、GST）、報(bào)告目的蛋白表達(dá)情況（GFP）等。但是，當(dāng)融合標(biāo)簽完成了它的使命，又會(huì)影響下游的某些實(shí)驗(yàn)時(shí)，例如免疫動(dòng)物、影響目的蛋白活性，我們就需要考慮如何將其去除。小達(dá)君為您推薦一款去除融合標(biāo)簽的利器——Lucigen的SelecTEV? Protease，簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)操作即可得到較純的目的蛋白。

SelecTEV?蛋白酶是一種基因工程改造的煙草蝕刻病毒（TEV）蛋白酶，通過His標(biāo)簽的親和層析從大腸桿菌中純化，SDS-PAGE分析表明其純度為90％。SelecTEV?蛋白酶能夠識(shí)別Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七個(gè)氨基酸以及與其密切相關(guān)的序列，并在Gln和Gly殘基之間進(jìn)行切割。 這七種氨基酸序列在蛋白質(zhì)中很少見，使得SelecTEV?蛋白酶成為從融合蛋白中去除標(biāo)簽的理想選擇。利用蛋白酶N-末端的His標(biāo)簽通過親和層析即可從酶切反應(yīng)中除去SelecTEV?蛋白酶。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

• 經(jīng)過基因工程改造，與天然蛋白酶相比具有更高的特異性，活性和穩(wěn)定性；

• 帶有His標(biāo)簽（六個(gè)組氨酸），更易于去除；

• 1unit SelecTEV?蛋白酶在30°C下、1h內(nèi)可以切割≥85％的3μg對(duì)照底物；

• SelecTEV?蛋白酶最佳切割溫度30°C，但在很寬的溫度（4 - 30°C）和pH（6.0 - 8.5）范圍內(nèi)有效，以適應(yīng)您的特定蛋白質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)流程如下：

酶切反應(yīng)完成后，用標(biāo)簽特異性純化柱去除融合標(biāo)簽，收集流穿液。為去除流穿液中的TEV蛋白酶，利用鎳柱進(jìn)行二次純化，得到的流穿液中的蛋白即為純的目的蛋白。

產(chǎn)品信息：

Lucigen公司成立于1998年，提供各類用于分子生物學(xué)研究相關(guān)產(chǎn)品，可以使研究者成功克隆較難克隆的基因。2016年Lucigen收購了Illumina旗下Epicentre產(chǎn)品線，2018年又被英國(guó)LGC公司收購。目前產(chǎn)品線主要包括：體外轉(zhuǎn)錄、基因克隆（BAC克隆試劑盒）、感受態(tài)細(xì)胞（TG1噬菌體文庫構(gòu)建感受態(tài)）、體外擴(kuò)增、轉(zhuǎn)座子突變、蛋白表達(dá)、核酸提取等。