GFP融合蛋白免疫沉淀的新選擇——GFP selector
還在用傳統方法進行GFP融合蛋白免疫沉淀？那你就是Outman了，來看看IBA Lifesciences的GFP selector，給您提供GFP融合蛋白免疫沉淀的新選擇！
傳統的GFP融合蛋白免疫沉淀是基于與GFP特異性抗體非共價鏈接的protein A或protein G結合在固相，從而拉下蛋白的原理（見圖1 A），其產率和效率通常受限于一抗的特異性和固相上protein A/G的結合能力。通常，在用SDS緩沖液洗脫時，抗體發生變性并與GFP融合蛋白及相互作用的配體一起從樹脂上分離下來。因此，洗脫液中通常含大量一抗重鏈和輕鏈（見圖1 B），妨礙鑒定蛋白的相互作用，還有可能影響下游實驗，比如蛋白質印跡或質譜分析。
GFP selector是一種新穎的高品質樹脂，用于高效、可重復的GFP融合蛋白免疫沉淀。GFP selector含單域抗體(single-domain antibody,sdAb)，可識別GFP及其衍生物，具有高特異性和pmol級親和力。重要的是，GFP融合蛋白可以從GFP selector洗脫而不被抗體重鏈或輕鏈污染（見圖1 C），因此可以輕易地鑒定與GFP融合蛋白特異性結合的蛋白。
△圖1
GFP selector與傳統GFP免疫沉淀的比較：
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傳統免疫沉淀法使用與protein A偶聯的GFP特異性抗體，結合GFP蛋白；
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傳統法在洗脫時，抗體輕鏈和重鏈與抗原一起從樹脂中洗脫；
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由于GFP特異單域抗體與固相的共價穩定連接，結合的GFP融合蛋白從GFP selector被洗脫時不會有抗體重鏈或輕鏈污染。
GFP selector也能結合更高容量的GFP融合蛋白（每μl樹脂結合>4μg GFP，見圖2 A）。與競爭產品比較，只有GFP selector能夠結合含GFP的HeLa裂解物中所有靶蛋白（見圖3），因此，它明顯優于競爭產品和傳統基于protein G的方法。
△圖2
GFP selector具有高容量和高特異性：
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將GFP Selector和競爭產品與飽和的重組GFP蛋白孵育，通過SDS-PAGE和考馬斯染色分析1μl樹脂的容量；
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將相同體積的GFP selector和競爭產品分別與不含任何GFP標記蛋白的HeLa裂解物一起孵育，洗滌后，產物通過SDS-PAGE分離并進行銀染色分析。
注：與競爭產品相比，GFP selector背景信號弱
△圖3
GFP selector與競爭產品的免疫沉淀結果：
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將等量GFP Selector和競爭產品與1ml含GFP標記蛋白的HeLa裂解物一起孵育，通過考馬斯染色和蛋白印跡分析上樣、洗滌產物、洗脫產物。
產品優勢：
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高特異性：識別GFP，mEGFP，sfGFP，Emerald GFP及最常見的CFP和YFP變體，不與mCherry，mRFP，dsRed，mTagBFP及其衍生物發生交叉反應；
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高容量：每μl樹脂結合>4μg GFP；
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應用：推薦用于免疫沉淀、質譜。
此外，IBA還提供其他融合標簽免疫沉淀試劑盒：
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產品名稱 |
貨號 |
規格 |
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GFP Selector |
2-9131-002 |
200μl Slurry for 10 reactions |
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2-9131-005 |
500μl Slurry for 25 reactions |
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2-9131-020 |
2000μl Slurry for 100 reactions |
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GFP Selector Kit |
2-9132-008 |
1 Kit |
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RFP Selector |
2-9141-002 |
200μl Slurry for 10 reactions |
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2-9141-005 |
500μl Slurry for 25 reactions |
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2-9141-020 |
2000μl Slurry for 100 reactions |
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RFP Selector Kit |
2-9142-008 |
1 Kit |
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TagFP Selector |
2-9151-002 |
200μl Slurry for 10 reactions |
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2-9151-005 |
500μl Slurry for 25 reactions |
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2-9151-020 |
2000μl Slurry for 100 reactions |
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TagFP Selector Kit |
2-9152-008 |
1 Kit |
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MBP Selector |
2-9111-002 |
200μl Slurry for 10 reactions |
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2-9111-005 |
500μl Slurry for 25 reactions |
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2-9111-020 |
2000μl Slurry for 100 reactions |
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MBP Selector Kit |
2-9112-008 |
1 Kit |
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GST Selector |
2-9121-002 |
200μl Slurry for 10 reactions |
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2-9121-005 |
500μl Slurry for 25 reactions |
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2-9121-020 |
2000μl Slurry for 100 reactions |
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GST Selector Kit |
2-9122-008 |
1 Kit |
IBA lifesciences（德國）：IBA公司總部位于德國。二十年來，IBA以杰出的專利技術Strep-tag?系統為基礎，發展出完整的產品組合，涵蓋重組蛋白表達、純化與固定以及特定細胞從全血或相關體液中分離的技術。同時，IBA也是全球領先的核酸合成專家，在DNA及RNA寡核苷酸的合成上已有超過二十年的經驗，能根據客戶的選擇，生產含有特定染料或化學修飾的特殊寡核苷酸。
