流式細胞術在日常實驗中經常被用到，以流式細胞儀為工具，通過多種熒光標記的抗體以及熒光染料對細胞進行多參數分析，其強大的信息收集和處理能力，可以為研究人員呈現豐富而全面的細胞信息。

目前，流式細胞分析儀已經從只能同時檢測幾個參數發展到可以同時檢測幾十個參數，比如最新的全光譜流式細胞儀系統已經可實現同時40色的多色分析。為了滿足大家的需求，BioLegend公司也發布了用于全光譜流式細胞儀的新熒光，包括SparkBlue?550和Spark NIR?685。下面我們就一起來學習一下這兩種新熒光吧！

一、SparkBlue?550

Spark Blue?550被488nm藍色激光激發并在550nm處發射，介于AlexaFluor^?488或FITC和PE的峰值發射之間。SparkBlue?550的亮度與FITC相當。405nm紫外激光可以進一步增加這幾種熒光不互相混合的情況。

（一）Spark Blue?550可與FITC和PE抗體區別開

使用抗CD19-Spark Blue?550與CD4-BV570?、CD38-PE以及CD40-FITC等不同組合抗體對人全血進行染色。圖中數據均來至于淋巴細胞門。結果可以看出SparkBlue?550可以完全與FITC和PE熒光區別開，該數據使用Cytek?Aurora流式儀檢測。

（二）Spark Blue?550染色的一致性和有效性

用抗CD4和抗CD19的不同熒光抗體組合對人全血染色，結果顯示Spark Blue?550染色具有有效性以及和其他常見熒光PE、AF647相比染色后相應群體比例也具有一致性。

二、Spark NIR? 685

由于近紅外（NIR）范圍內的熒光發射光譜以及光電倍增管（PMT）對800nm以上發射波長的不敏感性，633nm紅色激光器僅限于2-3個熒光。借助全光譜流式細胞儀，APC和AlexaFluor?700的發射峰之間的光譜間隙可檢測Spark NIR?685等新型熒光。Spark NIR?685可被633 nm激發，最大發射波長為685 nm，與FITC具有相似的亮度。

（一）使用Spark NIR?685熒光來擴展配色方案

來自相同供體的全血用圖A或B配色方案染色。圖A包括抗人CD4-FITC、CD19-Alexa Fluor700、CD8-PacificBlue ^TM、CD3-PE以及CD56-PE-Cy7的抗體。圖B包括抗人CD4-Spark NIR ^TM685、CD19-AlexaFluor 700、CD8-APC-Fire^TM 750、CD3-PE以及CD56-APC的抗體。

三、以3激光的Aurora全光譜流式細胞儀為例，以下是其熒光通道

四、在我們的幫助下完善多色配色方案

隨著流式細胞術多色配色中參數的數量不斷增加，多色配色變得越來越困難。如果您需要幫助，請與我們的技術支持團隊聯系，發送郵件至tech_immumo@dakewe.net。

*備注：Brilliant Violet?是Sirigen Group 的商標。AlexaFluor^?和Pacific Blue?是Thermo Fisher Scientific及其子公司的注冊商標。Cytek?是Cytek Biosciences的商標。Spark Blue?和Spark NIR?是BioLegend的商標。