“Fc Blocking”可以不做嗎？你是否經(jīng)常在流式染色實驗中聽到這樣的疑問？

今天小達君就要給大家介紹一下什么是Fc 受體封閉劑，為什么需要做“Fc Blocking”。

在我們流式實驗中，通常使用的抗體都是會有Fc段存在的，而細胞如果高表達Fc受體（比如巨噬細胞、B細胞或者腫瘤細胞等），那么在抗體染色的過程中，很有可能抗體Fc段會與細胞表面的Fc受體進行結合，從而產(chǎn)生非特異性的染色結果，最終導致流式實驗結果假陽性/假陰性的存在。

因此，在流式實驗過程中，除非檢測細胞中Fc受體的表達，通常我們會使用純化的抗體來進行Fc受體的封閉，如圖：

那么，是否你還有這樣的疑問，我用BSA做封閉可以嗎？其實呢，BSA是牛血清白蛋白，可以理解為牛來源的Ab，存在Fc段，用BSA理論上也可以使細胞表面的FcR不再結合流式抗體的Fc段。但是，牛來源的抗體的Fc段不一定能和目的細胞（人源、鼠源等）表面的FcR結合，所以封閉作用是有限的。如圖，沒有使用封閉劑但使用了BSA跟使用封閉劑的染色結果差異會特別大：

（OCI-AML3細胞系用TruStainFcX（Cat#101319）封閉（紅色TruStainFcX直方圖）以及用5%BSA封閉（藍色BSA直方圖）后，染APC-CD11b（cat#101211,cloneM1/70）結果）

因此，Fc受體的封閉需要使用專門針對于目的細胞的抗體效果是比較好的。

現(xiàn)在，你知道為什么需要做Fc Blocking了吧？接下來，小達君要給大家簡單介紹一下BioLegend最新推出的受體封閉劑TruStainFcX? PLUS（Cat#156603）。它可有效防止抗體與小鼠細胞的非特異的結合。其克隆號（clone：S17011E）染色結果更優(yōu)于之前的Fc受體封閉劑 TruStain FcX?（Cat#101319））克隆號（Clone:93），并且從抗體的用量上來說大大減少，可節(jié)約實驗成本。

（將小鼠脾臟細胞分別用TruStainFcX ^TM PLUS（0.25μg/test，紫色填充直方圖），TruStainFcX ^TM（克隆93,1μg/test，紅線）封閉之后用CD90.2FITC染色，與未處理的小鼠脾臟細胞（黑線）作比較。結果顯示TruStainFcX^TM PLUS封閉效果更優(yōu)。）

感興趣的話，趕快來試試吧?。?！

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