純化流程

第三代 Strep-tag^? 系統(tǒng)

His-tag 系統(tǒng)

平衡柱子

2 CV Buffer W
成分：
100 mM Tris/HCl pH8.0；
150 mM NaCl；
1 mM EDTA；

2 CV Ni-NTA Lysis Buffer
成分：
50 mM NaH₂PO₄；
300 mM NaCl；
10 mM imidazole，依結(jié)合狀態(tài)調(diào)整；
Adjust pH to 8.0；

加入蛋白提取液

在上樣前，為移除可能產(chǎn)生的沉淀物，凍存的細(xì)胞提取液需先離心一次（18000 xg，5 min，4°C）

沖洗純化柱

5x 1 CV Buffer W

2x 4 CV Ni-NTA Wash Buffer
成分：
50 mM NaH₂PO₄；
300 mM NaCl；
20 mM imidazole；
Adjust pH to 8.0；

洗脫蛋白

6 x 0.5 CV Buffer BXT
成分：
Buffer W；
100 mM biotin；

4 x 0.5 CV Ni-NTA Elution Buffer
成分：
50 mM NaH₂PO₄；
300 mM NaCl；
250 mM imidazole；
Adjust pH to 8.0；

再生/保存柱子

4 CV 10 mM NaOH
8 CV Buffer W

0.5 M NaOH for 30 mins
30% EtOH

試劑

耐受濃度（測量值，不代表最高值）

DTT

45 mM

β-Mercaptoetanol

45 mM

EDTA

50 mM

Imidazole

250 mM

NaCl

4.5 M

Urea

6 M